Determinacxión de la grasa por hidrólisis ácida
El material graso en alimentos, esta formado de diversas sustancias lípidas, las uniones entre ellos pueden romperse por hidrólisis para producir lípidos libres y así poder obtener el total de estos materiales.
Fundamento
Se basa en la disolución de la proteína en el ácido y la grasa que se separa, puede ser extraída utilizando como disolvente orgánico, una mezcla de éter etílico-éter de petróleo.
Reactivos
Ácido clorhídrico (25+11) v/v Alcohol etílico, Grado reactivo
Éter de petróleo (P.E. 40-60°C), Grado reactivo libre de grasa Éter etílico, Grado reactivo libre de grasa
Material
-Algodón absorbente libre de grasa -Cuerpos de ebullición
-Embudo de filtración, tallo corto -Probetas graduadas
-Tubo de extracción de Mojonnier (Fig. 2)
-Vaso de precipitados, cápsula de vidrio, níquel o aluminio de 1.5 ml -Balanza analítica con sensibilidad de 0.1 mg
-Baño de agua con sistema eléctrico para mantener a 70-80ºC -Estufa con regulador de temperatura para mantener a 100ºC -Material común de laboratorio.
Procedimiento
Pesar de 1-2 g de muestra finamente molida en un vaso de precipitados de 50 ml (la muestra puede ser pesada directamente en el tubo de extracción de Mojonnier) agregar 2 ml de alcohol etílico y agitar adecuadamente para humedecer la muestra. Agregar 10 ml de ácido clorhídrico diluido, 2 cuerpos de ebullición, mezclar y colocar en baño de agua durante 30-40 minutos, agitando ocasionalmente durante este tiempo.
Agregar 10 ml de alcohol etílico, mezclar y dejar enfriar.
Vaciar la mezcla al tubo de extracción, lavar el vaso con 3 porciones y un total de 25 ml. de éter etílico (pasando cada lavado al tubo de extracción).
Tapar el tubo con un tapón de hule sintético y agitar vigorosamente durante un minuto. Agregar 25 ml de éter de petróleo y agitar nuevamente durante un minuto. Dejar el tubo en posición vertical hasta que el líquido superior esté prácticamente claro o centrifugar 20 minutos a aproximadamente 600 rpm.
Decantar tanto como sea posible la solución éter-grasa, sobre un filtro de algodón empacado con firmeza en el embudo de filtración, recibiendo el éter en un vaso o cápsula de 125 ml a peso constante (puede ser lleva do a peso constante con cuerpos de ebullición). Lavar la boca del tubo de extracción y el tapón con varios ml de una mezcla de disolventes en partes iguales recibiendo en el mismo vaso.
Extraer el líquido sobrante del tubo dos veces más, utilizando para este propósito 15 ml de cada disolvente en cada ocasión. Agitar bien después de cada adición de éter. Decantar la solución éter-grasa, en el mismo embudo utilizado anteriormente; lavar el embudo y el tallo del embudo con varios ml de una mezcla de disolventes en partes iguales.
Evaporar la mezcla de disolventes lentamente sobre baño de vapor (en un sistema de extracción) secar la grasa en una estufa a 100°C hasta peso constante, enfriar – en desecador y pesar.
Corregir el resultado por la determinación de un blanco de reactivos.
Calculos
En donde:
P2= Peso del vaso o cápsula con grasa a peso constante P1 = Peso del vaso o cápsula vacía a peso constante
PM = Peso de la muestra en gramos
Fuente: Apuntes de Taller de Frutas y Hortalizas de la UNIDEG
